我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pGFP-B-RS
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 7388 bp
- 载体类型:
- Viral Expression & Packaging Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- OriGene
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- CMV
pGFP-B-RS 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGFP-B-RS 载体序列
LOCUS pGFP-B-RS. 7388 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980 DEFINITION HuSH-29 retroviral vector with kanamycin and blasticidin resistance markers and a TurboGFP gene, for expressing an shRNA from the U6 promoter. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS pGFP-B-RS SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 7388) AUTHORS OriGene TITLE Direct Submission REFERENCE 2 (bases 1 to 7388) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article" COMMENT The shRNA cassette consists of a 29-bp gene-specific sequence, followed by a 7-bp loop, followed by the reverse complement of the 29-bp sequence, followed by a TTTTTT terminator. FEATURES Location/Qualifiers source 1..7388 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" promoter 90..330 /label=U6 promoter /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA" misc_feature 334..385 /label=shRNA site /note="shRNA site" /note="shRNA insertion site" promoter 441..649 /label=SV40 promoter /note="SV40 early promoter" CDS 676..1071 /label=BSD /note="blasticidin S deaminase" LTR 1153..1746 /label=LTR /note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia virus" rep_origin complement(2118..2706) /direction=LEFT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" polyA_signal complement(2893..3369) /label=hGH poly(A) signal /note="human growth hormone polyadenylation signal" primer_bind 3380..3396 /label=M13 rev /note="common sequencing primer, one of multiple similar variants" CDS complement(3490..4185) /label=TurboGFP /note="improved green fluorescent protein from Pontellina plumata (Evdokimov et al., 2006)" promoter complement(4229..4247) /label=T7 promoter /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase" promoter complement(4273..4476) /label=CMV promoter /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early promoter" enhancer complement(4477..4856) /label=CMV enhancer /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer" CDS complement(5094..5900) /label=KanR /note="aminoglycoside phosphotransferase" LTR 6034..6503 /label=LTR /note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia virus" misc_feature 6568..6767 /label=MMLV Psi /note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus (MMLV)" CDS 6960..7376 /label=gag (truncated) /note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag gene lacking the start codon"