我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
The pK19mobsacB is a Corynebacterium glutamicum gene Knockout vector.
- 载体名称:
- pK19mobsacB
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 5719 bp
- 载体类型:
- Function E.coli Editing plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Okamoto S, Niki H.
- 启动子:
- sacB
- 感受态:
- JM108
- 培养温度:
- 37℃
pK19mobsacB 载体载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pK19mobsacB 载体载体序列
LOCUS 40924_26496 5719 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION Cloning vector pK19mobsacB DNA, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5719)
AUTHORS Okamoto S, Niki H.
TITLE NBRP cloning vector collection sequence project
JOURNAL Unpublished
REFERENCE 2 (bases 1 to 5719)
AUTHORS Okamoto S, Niki H.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (07-APR-2017) Contact:Sho Okamoto National Institute of
Genetics, Microbial Genetics Laboratory; 1111 Yata, Mishima,
Shizuoka 411-8540, Japan URL
:https://www.nig.ac.jp/labs/MicroGen/index.html
REFERENCE 3 (bases 1 to 5719)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 5719)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName:
"Unpublished"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(07-APR-2017) Contact:Sho Okamoto National Institute of Genetics,
Microbial Genetics Laboratory; 1111 Yata, Mishima, Shizuoka
411-8540, Japan URL :https://www.nig.ac.jp/labs/MicroGen/index.html"
COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5719
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
CDS 346..1137
/codon_start=1
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter 1186..1631
/label=sacB promoter
/note="sacB promoter and control region"
CDS 1632..3050
/codon_start=1
/label=SacB
/note="secreted levansucrase that renders bacterial growth
sensitive to sucrose"
/translation="MNIKKFAKQATVLTFTTALLAGGATQAFAKETNQKPYKETYGISH
ITRHDMLQIPEQQKNEKYQVSEFDSSTIKNISSAKGLDVWDSWPLQNADGTVANYHGYH
IVFALAGDPKNADDTSIYMFYQKVGETSIDSWKNAGRVFKDSDKFDANDSILKDQTQEW
SGSATFTSDGKIRLFYTDFSGKHYGKQTLTTAQVNVSASDSSLNINGVEDYKSIFDGDG
KTYQNVQQFIDEGNYSSGDNHTLRDPHYVEDKGHKYLVFEANTGTEDGYQGEESLFNKA
YYGKSTSFFRQESQKLLQSDKKRTAELANGALGMIELNDDYTLKKVMKPLIASNTVTDE
IERANVFKMNGKWYLFTDSRGSKMTIDGITSNDIYMLGYVSNSLTGPYKPLNKTGLVLK
MDLDPNDVTFTYSHFAVPQAKGNNVVITSYMTNRGFYADKQSTFAPSFLLNIKGKKTSV
VKDSILEQGQLTVNK"
oriT complement(3407..3516)
/direction=LEFT
/label=oriT
/note="incP origin of transfer"
promoter complement(3751..3841)
/label=cat promoter
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
promoter complement(4035..4125)
/label=cat promoter
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
rep_origin 4485..5073
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
protein_bind 5361..5382
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 5397..5427
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 5435..5451
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 5459..5475
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
misc_feature complement(5487..5543)
/label=MCS
/note="pUC18/19 multiple cloning site"
primer_bind complement(5544..5560)
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"