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pMMZ284 载体 (V016367)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pMMZ284
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
6172 bp
载体类型:
Cloning vector
复制子:
ori
载体来源:
Mansouri M, Hussherr M-D., Strittmatter T, Buchmann P
启动子:
SV40

pMMZ284 载体图谱

pMMZ2846172 bp30060090012001500180021002400270030003300360039004200450048005100540057006000M13 revlac operatorlac promoterCAP binding siteoriAmpRAmpR promoterT7 promoterMyr-TtCBD-nGFPbGH poly(A) signalf1 oriSV40 promoterNeoR/KanRSV40 poly(A) signal

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pMMZ284 载体序列

LOCUS       62056_17185        6172 bp DNA     circular SYN 21-APR-2021
DEFINITION  Cloning vector pMMZ284, complete sequence.
ACCESSION   MW731449
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6172)
  AUTHORS   Mansouri M, Hussherr M-D., Strittmatter T, Buchmann P, Xue S, 
            Camenisch G, Fussenegger M.
  TITLE     Smart-Watch-Programmed Green-Light-Operated Percutaneous Control of 
            Therapeutic Transgenes
  JOURNAL   Unpublished
REFERENCE   2  (bases 1 to 6172)
  AUTHORS   Mansouri M, Hussherr M-D., Strittmatter T, Buchmann P, Xue S, 
            Camenisch G, Fussenegger M.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (12-MAR-2021) DBSSE, ETH, Mattenstrasse 26, Basel, Choose 
            A State 4058, Switzerland
REFERENCE   3  (bases 1 to 6172)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: 
            "Unpublished"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (12-MAR-2021) DBSSE, ETH, Mattenstrasse 26, Basel, Choose A State 
            4058, Switzerland"
COMMENT     ##Assembly-Data-START##
            Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing 
            ##Assembly-Data-END##
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6172
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     primer_bind     complement(49..65)
                     /label=M13 rev
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     protein_bind    complement(73..89)
                     /label=lac operator
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(97..127)
                     /label=lac promoter
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    complement(142..163)
                     /label=CAP binding site
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(451..1036)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(1210..2067)
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(2068..2172)
                     /label=AmpR promoter
     promoter        2494..2512
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             2544..3938
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="Myr-TtCBD-nGFP"
                     /label=Myr-TtCBD-nGFP
                     /note="Supercharged membrane anchored TtCBD"
                     /protein_id="QTW97888.1"
                     /translation="MGCINSKRKDASPEDLGTGLLEALLRGDLAGAEALFRRGLRFWGP
                     EGILEHLLLPVLREVGEAWHRGEIGVAEEHLASTFLRARLQELLDLAGFPPGPPVLVTT
                     PPGERHEIGAMLAAYHLRRKGVPALYLGPDTPLPDLRALARRLGAGAVVLSALLSEPLR
                     ALPDGALKDLAPRVFLGGQGAGPEEARRLGAEYMEDLKGLAEALWLPRGPEKEAIASKG
                     EELFDGVVPILVELDGDVNGHEFSVRGEGEGDATEGELTLKFICTTGELPVPWPTLVTT
                     LTYGVQCFSDYPDHMDQHDFFKSAMPEGYVQERTISFKDDGTYKTRAEVKFEGDTLVNR
                     IELKGIDFKEDGNILGHKLEYNFNSHDVYITADKQENGIKAEFEIRHNVEDGSVQLADH
                     YQQNTPIGDGPVLLPDDHYLSTESALSKDPNEDRDHMVLLEFVTAAGIDHGMDELYKTA
                     SGSTGV"
     polyA_signal    3975..4199
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      4245..4673
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        4687..5016
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     CDS             5083..5874
                     /label=NeoR/KanR
                     /note="aminoglycoside phosphotransferase"
     polyA_signal    6051..6172
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"