我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- Ganesh-R1
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 11450 bp
- 载体类型:
- Reporter vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Swanson CI, Hinrichs T, Johnson LA, Zhao Y, Barolo S.
- 启动子:
- lac UV5
Ganesh-R1 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
Ganesh-R1 载体序列
LOCUS 40924_1014 11450 bp DNA circular SYN 17-DEC-2018 DEFINITION Reporter vector Ganesh-R1, complete sequence. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS . SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 11450) AUTHORS Swanson CI, Hinrichs T, Johnson LA, Zhao Y, Barolo S. TITLE A directional recombination cloning system for restriction- and ligation-free construction of GFP, DsRed, and lacZ transgenic Drosophila reporters JOURNAL Gene 408 (1-2), 180-186 (2008) PUBMED 18077106 REFERENCE 2 (bases 1 to 11450) AUTHORS Rogers CI, Hinrichs T, Johnson LA, Zhao Y, Barolo S. TITLE Direct Submission JOURNAL REFERENCE 3 (bases 1 to 11450) TITLE Direct Submission REFERENCE 4 (bases 1 to 11450) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Gene 408 (1-2), 180-186 (2008)" COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted (02-FEB-2007) Cell " COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article" FEATURES Location/Qualifiers source 1..11450 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" misc_feature complement(1..233) /label=P element 3' end /note="P element 3' end" gene 242..4247 /gene="white" /allele="+mC" /label=white protein_bind 4255..4379 /label=attR1 /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction" promoter 4404..4434 /label=lac UV5 promoter /note="E. coli lac promoter with an 'up' mutation" CDS 4488..5144 /label=CmR /note="chloramphenicol acetyltransferase" CDS 5489..5791 /label=ccdB /note="CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase" protein_bind complement(5835..5959) /label=attR2 /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction" misc_feature 5965..6712 /label=spacer sequence includes partial KanR gene /note="spacer sequence includes partial KanR gene" regulatory 6713..6846 /label=Drosophila melanogaster Hsp70 minimal promoter /note="Drosophila melanogaster Hsp70 minimal promoter" /regulatory_class="promoter" CDS 6920..7594 /label=DsRed-Express /note="rapidly maturing tetrameric variant of DsRed fluorescent protein (Bevis and Glick, 2002)" misc_feature 7598..7714 /gene="DsRed.T4-NLS-SV40t" /label=Drosophila melanogaster tra gene NLS /note="Drosophila melanogaster tra gene NLS" polyA_signal 7852..7986 /label=SV40 poly(A) signal /note="SV40 polyadenylation signal" misc_feature complement(8105..8690) /label=P element 5' end rep_origin complement(8925..9513) /direction=LEFT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" CDS complement(9687..10544) /label=AmpR /note="beta-lactamase" promoter complement(10545..10649) /label=AmpR promoter