我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- FHRE-Luc
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 5094 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression, Luciferase
- 复制子:
- ori
- 拷贝数:
- High Copy
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
- 5'引物:
- RVprimer3
FHRE-Luc 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
FHRE-Luc 载体序列
LOCUS 40924_820 5094 bp DNA circular SYN 17-AUG-2021 DEFINITION Reporter plasmid for FOXO3a. Forkhead responsive element with luciferase readout. . ACCESSION . VERSION . KEYWORDS . SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 5094) AUTHORS Brunet A, Bonni A, Zigmond MJ, Lin MZ, Juo P, Hu LS, Anderson MJ, Arden KC, Blenis J, Greenberg ME TITLE Akt promotes cell survival by phosphorylating and inhibiting a Forkhead transcription factor. JOURNAL Cell 1999 Mar 19;96(6):857-68. PUBMED 10102273 REFERENCE 2 (bases 1 to 5094) TITLE Direct Submission REFERENCE 3 (bases 1 to 5094) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Cell"; date: "1999-03-19"; volume: "96(6)"; pages: "857-68" COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article" FEATURES Location/Qualifiers source 1..5094 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" polyA_signal 75..123 /label=poly(A) signal /note="synthetic polyadenylation signal" misc_feature 137..228 /label=pause site /note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from the human alpha-2 globin gene" promoter 367..563 /label=SV40 promoter /note="SV40 early promoter" CDS 599..2248 /codon_start=1 /label=luciferase /note="firefly luciferase" /translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV" polyA_signal complement(2292..2413) /label=SV40 poly(A) signal /note="SV40 polyadenylation signal" primer_bind complement(2661..2678) /label=L4440 /note="L4440 vector, forward primer" rep_origin complement(2832..3420) /direction=LEFT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" CDS complement(3594..4451) /codon_start=1 /label=AmpR /note="beta-lactamase" /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS LIKHW" promoter complement(4452..4556) /label=AmpR promoter rep_origin 4583..5038 /direction=RIGHT /label=f1 ori /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow indicates direction of (+) strand synthesis"