pEBM123 载体图谱和序列

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:: pEBM123

载体抗性:: Ampicillin

载体长度:: 8217 bp

载体类型:: Cloning vector

复制子:: ori

宿主:: Yeast

载体来源:: Lynd LR.

启动子:: URA3

pEBM123 载体载体图谱

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pEBM123 载体载体序列

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LOCUS       V007670                 8217 bp    DNA     circular SYN 17-DEC-2018
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V007670
VERSION     V007670
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 8217)
  AUTHORS   Lynd LR.
  TITLE     Identification of sporulation histidine kinases in C. thermocellum
  JOURNAL   Unpublished
REFERENCE   2  (bases 1 to 8217)
  AUTHORS   Mearls EB.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (06-APR-2013) Engineering, Dartmouth College, 14
            Engineering Dr, Hanover, NH 03755, USA
REFERENCE   3  (bases 1 to 8217)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 8217)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName:
            "Unpublished"
            SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
            (06-APR-2013) Engineering, Dartmouth College, 14 Engineering Dr,
            Hanover, NH 03755, USA"
            SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..8217
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     terminator      97..344
                     /label="CYC1 terminator"
                     /note="transcription terminator for CYC1"
     rep_origin      complement(592..1180)
                     /direction=LEFT
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             complement(1354..2211)
                     /label="AmpR"
                     /note="beta-lactamase"
     CDS             complement(2310..3110)
                     /label="URA3"
                     /note="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required for
                     uracil biosynthesis"
     promoter        complement(3111..3331)
                     /label="URA3 promoter"
     misc_feature    3359..3862
                     /label="CEN/ARS"
                     /note="S. cerevisiae CEN6 centromere fused to an
                     autonomously replicating sequence"
     CDS             complement(4094..5095)
                     /label="repB"
                     /note="RepB replication protein"
     regulatory      5581..6228
                     /gene="gapD"
                     /regulatory_class="promoter"
     gene            5581..6228
                     /gene="gapD"
                     /label="gapD"
     CDS             6229..6876
                     /gene="cat"
                     /label="Chloramphenicol acetyltransferase"
                     /note="Chloramphenicol acetyltransferase from
                     Staphylococcus aureus. Accession#: P00485"
     CDS             6895..8217
                     /codon_start=1
                     /product="histidine kinase"
                     /label="histidine kinase"
                     /note="from Clostridium thermocellum Clo1313_1711"
                     /protein_id="AGO62095.1"
                     /translation="MNIKKDLKKPYPLKLKKSGRKLLAERYYQILRRKYNCLYEIFNSI
                     ELPIVSISYPSFNIIGINNKAKKDVKLLRKCVAFVREVKKGNNILNALSKVYSCRNQKY
                     LAEMLFTKSPVYLPNVEIDNNGRKIYYKLMHQPILNSRNKIVGFLIIPIDITQEIEQKK
                     YIENLARFKDEFLYGITHEFKTPLVVISSALQAIEALCRDELTDRVKKYLNRIKQNTFR
                     QIRLVNNLLDIARIEAGHIKIFKRNLDIVALTRLITESVSMFADLKGVQLLFYSNIDKK
                     IIAIDEEKYERIMLNLLSNAIKFTPKDRSVYVEVSAKEGCVEIKVKDSGIGIPKDKIKT
                     IFERFGQVDSSLSRNAEGTGIGLSLVRMFVNAMGGEISVTSEENIGSTFTVTLPDAVTE
                     CGYENDCFDDLRDERLIQAIKIEFSDIYFEEKEDKKKSLET"

pEBM123 载体 (V007670)

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质粒操作方法

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