1. 透析5
mg/ml 抗体溶液,除使用PBS之外,其方法与基本方案中的步骤1完全相同。透析完毕,将抗体溶液置于一个试管中,并测A
280
处吸光度。用PBS将其稀释至3 mg/ml。
2. 往一个1. 5 ml 的微量离心管中加入3 mg/ml 的抗体溶液100 碱性磷酸酶90 μl。再加入5 μl 的25%戊二醛,温和地混匀,置于室温下备用.
3. 于0、5、10、15、30、60及120 min 时分别取出25 μl 小份反应液,分别置于独立的1.5 ml 微量离心管中(冰浴),各加125 μl PBS,然后各加1.1 ml Tris/卵清蛋白缓冲液。
4. 透析样品,方法同步骤1。用直接ELISA法检测样品中的碱性磷酸酶的活性,以确定最佳的交联时间。采用最佳交联时间重复步骤1~3。
5. 加入叠氮化钠至终浓度0.1%,于4℃避光可保存约1年,或加等体枳的甘油,于 - 20℃可保存约1年。