1. 重复基本方案1步骤1，按1：10分传到终体积100 ml 的完全DMEM-10/HEPES中。
2. 准备传代细胞时，应将175 cm
2
培养瓶中的内容物（100 ml）转移到—个850 cm
2
旋转培养瓶中，另加150 ml 完全DMEM-10/HEPES，盖紧瓶盖，置于转瓶培养装置上于37℃培养1~2天。
3. 用饱蘸70%乙醇无菌海绵擦拭旋转培养瓶的瓶盖和瓶颈，打开瓶盖，加250 ml 完全DMEM-10/HEPES，盖紧瓶盖，再在转瓶装置上培养1~2天。
4. 如步骤3所述擦拭瓶盖及瓶颈。打开转瓶，加大约2 L 的完全DMEM-10/HEPES，加至几乎满瓶（根据转瓶容量计，总体枳大约2.5 L），盖紧瓶盖，并置转瓶培养装瓶上， 37℃培养直至培养液变黄色（大约5天）。
5. 将培养液倒入无菌的250 ml 的锥形离心管中，室温下250 g 离心20 min，收集上清， 弃沉淀，将上清分装成数管冻存。