直接凝集反应实验-试管凝集反应

一、操作步骤

1.  取洁净小试管14只分两排排列于试管架上,每排7只依次用蜡笔注明号码,于每管中分别加入0.5毫升生理盐水。


2.  在第1排1管中加入1:10稀释伤寒H血清0.5毫升,于管内连续吹吸3次,使血清与盐水充分混合,而后吸出0.5毫升注入第2管,同样予以混匀后吸出0.5毫升注入第3管。依次类推,稀释到第6管,自第6管吸出0.5毫升弃去。此时,自第1管至第6管的血清稀释倍数为1:20,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640。第7管不加血清作为对照。

3.  同法用吸管吸取1:10稀释伤寒杆菌O血清加入第2排第1管,并依次如上法予以稀释。

4.  用移液管吸取伤寒杆菌H菌液,加收第1排各管中每管0.5毫升(由盐水对照管开始,依次由后向前加入)此时血清稀释倍数又增加了一倍。

5.  同法于第2排各管中加入伤寒O菌液0.5毫升。

6.  将各管振荡混匀,放37℃水浴箱中2~4小时或37℃孵育箱中过夜次日取出观察结果。

二、观察结果

1.  观察切勿摇动试管,以免凝集块分散。

2.  先看对照管,此管应无凝集现象,管内液体仍成混浊状态。但如放置时间较长,细菌堆于管底成小圆点状,为阴性反应。

3.  试验管应自第1管看起,如有凝集时则于管底有不同大小的圆片状边缘不整齐的凝集物,上清则澄清透明或不同程度混浊。凝集的强弱可用“+”号表示如下:

“++++”凝集很强,管内液体完全澄清,凝集块完全沉于管底。

“+++”凝集强,管内液体不完全澄清稍有轻度混浊,凝集块沉于管底。

“++”凝集中等强度,液体半澄清,凝集块沉于管底。

“+”凝集弱,管内液体混浊,少量凝集块沉于管底。

“-”不凝集,管内液体和对照管同样混浊,无凝集块。

4.  轻轻振荡各管,观察凝集块的状态,对照管的细菌在振荡时呈烟雾状上升,随即消散,细菌分散仍呈混浊状态。“H”菌液的凝集块疏松呈棉状,大片沉于管底轻摇即升起,并极易破碎。“O”菌液凝集呈紧密颗粒状,沉于管底坚实致密,轻轻振摇不易升起,凝集颗粒较小不易摇碎。

5.  记录观察的结果并制定凝集效价。通常以能产生明显凝集(++)的血清大稀释倍数作为该血清的凝集效价。如血清的最低稀释度(即第1管1:40)仍无凝集应报告为低于1:40。如血清的最高稀释度(即第6管1:1280)仍显完全凝集现象。,应报该血清效价高于1:1280。

2014-12-12