将酶标记在第二抗体上，再与已形成的抗原抗体复合物中的第一抗体反应。目前广
泛应用的PAP法、ABC法是在间接法的原理和技术的基础上发展起来的。
1. 标本固定；
3. 1 %H 2 O 2 （或1 %H 2 O 2 甲醇）抑制内源性过氧化物酶，室温10～20 分钟；
4. 正常血清（1：10）孵育，室温20 分钟；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. 滴加酶标二抗，室温一小时；
8. PBS洗3×3 分钟；
9. 0.04 %DAB+0.03 %H 2 O 2 显色5～10 分钟；
10. 充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。
2. PBS洗涤2×3 分钟；
3. 1 %H 2 O 2 （或1 %H 2 O 2 甲醇）抑制内源性过氧化物酶，室温10～20 分钟；
4. 正常血清（1：10）孵育，室温20 分钟；
5. 滴加第一抗体，37 ℃1 小时或4 ℃过夜；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. 滴加酶标二抗，室温一小时；
8. PBS洗3×3 分钟；
9. 0.04 %DAB+0.03 %H 2 O 2 显色5～10 分钟；
10. 充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。
注意事项
间接法比直接法敏感，能增加染色强度，操作也较简便。缺点是非特异染色较重，敏感性较低。
2014-12-12