这种方法可在复合物体系中连接更多的PAP复合物，对抗原可进一步放大，因此灵
敏度更为增强，适用于微量抗原的检测。
1. 标本固定后，PBS洗涤；
3. PBS洗2×3 分钟；
4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟；
5. 滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. 滴加二抗，室温30 分钟；
8. PBS洗3×3 分钟；
9. 加PAP复合物，室温60 分钟；
10. PBS洗涤3×3 分钟；
12. PBS洗；
13. 二次加PAP；
14. PBS洗；
15. 0.04 %DAB+0.03 %H 2 O 2 显色5～10 分钟；
16. 苏木素复染核，封片，镜检。
2. 1 %H 2 O 2 （或1 %H 2 O 2 甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20 分钟；
3. PBS洗2×3 分钟；
4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟；
5. 滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. 滴加二抗，室温30 分钟；
8. PBS洗3×3 分钟；
9. 加PAP复合物，室温60 分钟；
10. PBS洗涤3×3 分钟；
11. 二次加酶标二抗；
12. PBS洗；
13. 二次加PAP；
14. PBS洗；
15. 0.04 %DAB+0.03 %H 2 O 2 显色5～10 分钟；
16. 苏木素复染核，封片，镜检。