IL-4生物学活性检测实验

一、IL-4生物学活性测定
CT.4S细胞悬液制备①
接种细胞于96孔培养板②

加待测样品和标准品③

加3H-TdR④

收集细胞,测定3H-TdR掺入量⑤
绘制标准曲线,计算待测样品的IL-4的活性单位⑥
注意事项
①用0.25%胰酶消化、收集生长旺盛的贴壁CT.4S细胞;经Hank’s液离心洗涤2次后,10%FCS-RPMI-1640培养液调制细胞浓度为1×10 5 /ml。

②接种细胞于96孔细胞培养板,每孔0.1 ml。

③加入适当稀释的待测样品和标准品,每孔0.1 ml。每个样品设3个复孔,同时设培养液对照。37度,5%CO 2 孵育48小时。

④与⑤同IL-2。

⑥以cpm为纵坐标,对应的不同稀释浓度IL-4标准品浓度为横坐标,在半对数图纸上绘制出标准曲线,再从标准曲线上查出待测样品中的IL-4含量。

关键点在IL-4诱生过程中,常同时产生一定量的IL-2,将影响IL-4的检测结果。因此,最好采用IL-2mAb吸附剂除去IL-2。

2014-12-12