乳酸菌都是一些兼厌氧菌，革兰氏阳性，杆状或球状，无芽孢，不运动，分解和合成能力较差，营养要求较高，需提供丰富的肽类、氨基酸和维生素，它们缺乏呼吸链成分、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶，在琼脂培养基表面或内层只形成较小的白色或淡色菌落。常用的分离培养基有番茄汁碳酸钙琼脂培养基、麦芽汁碳酸钙琼脂培养基。分离方法有平板划线法或经适当稀释后进行涂布平板法。
一、配制番茄汁碳酸钙琼脂培养基
倒平皿，凝固后待用；
二、平板分离
将优质的泡菜汁通过直接平板划线法或经适当稀释后进行涂布平板法分离出单菌落；
三、恒温培养
将上述平板分别放入25 ℃ 、37 ℃温箱培养48 h以上也可放入厌氧罐内培养；
四、观察菌落
乳酸菌在上述平板培养基表面只形成浅色（一般为淡黄或白色）的小菌落；
五、移种保存
将菌落接入斜面试管，经培养后作保存用。