水中细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌的总数。水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志，细菌数量越多，则水中有机质含量越大。本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。以1 ml水样在营养琼脂培养基中，于37 ℃培养24 h后所生长的细菌菌落的总数，作为水体受细菌污染程度的标志，我国规定1 ml自来水中细菌总数不得超过100个。
一、水样的采集与保藏
自来水：先将自来水龙头用火焰烧灼 3 min灭菌，然后再放水5-10 min，最后用无菌容器接取水样，并速送回实验室检测。
二、 水中细菌总数测定
自来水：用无菌移液管吸取1 ml水样，加入无菌培养皿中（每个水样重复3个培养皿），然后在每个上述培养皿内各加入约15 ml已融化并冷却至45-50 ℃的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，并轻轻旋转摇动，使水样与培养基充分混匀，冷凝后即成检测平板。然后将其倒置于37 ℃恒温箱内培养24 h。
三、 计菌落数
将培养24 h的平板取出，用肉眼观察，计平板上的细菌菌落数（计数时，对那些看来相似、距离很近但不相触的菌落，应一一计数。那些紧密接触而外观相异的菌落，也一一计数）。