酸奶中乳酸菌的测定实验

活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例,有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。由于乳酸菌对营养有复杂的要求,生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等,一般的肉汤培养基难以满足其要求。测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。要提高检出率,关键是选用特定良好的培养基。采用稀释平板菌落计数法,检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
一、样品稀释

先将酸奶样品搅拌均匀,用无菌移液管吸取样品25 ml加入盛有225 ml无菌水的三角瓶中,在旋涡均匀器上充分振摇,务必使样品均匀分散,即为10:1的样品稀释液,然后根据对样品含菌量的估计,将样品稀释至适当的稀释度。


二、制平板

选用2~3个适合的稀释度,培养皿贴上相应的标签,分别吸取不同稀释度的稀释液1 ml置于平皿内,每个稀释度作2个重复。然后用溶化冷却至46 ℃左右的MRS或改良CHALMERS培养基倒平皿,迅速转动平皿使之混合均匀,冷却成平板。

三、培养和计数

将平皿倒置于40 ℃恒温箱内培养24~48 h,观察长出的细小菌落,计菌落数目,按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
注意事项
1.  指示剂显色

由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈,酸碱指示剂应呈酸性显色反应。

2.  镜检形态

必要时,可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。保加利亚乳杆菌呈杆状,成单杆、或双杆菌或长丝状。嗜热链球菌,呈球状,成对、或短链、或长链状。

3.  参照比较

据介绍,改良CHALMERS培养基的检出率较MRS培养基高,M17培养基较适合于乳球菌的培养,在检测时可同时使用多个培养基作比较。

2014-12-12