病毒的血清学实验-ELISA检测乙脑病毒早期特异性IgM抗体

将抗μ链球蛋白(豚鼠抗兔IgM 抗体)非特异地吸附在固相上,加入待检乙脑病人血清,血清中的IgM能和抗μ链球蛋白结合。当再加入定量特异性日本乙脑病(JBEV)抗原和酶标记的相应抗体(兔抗IBEV IgG)时,病人血清抗体再与IBEV抗原和酶标抗IBEV IgG 结合作用于酶底物,酶底物显色反应,借此可测出血中IgM 抗体的含量。

1.  用包被液稀释豚鼠抗兔IgM 抗体至l0 (g/ml,加至40 孔板,每孔0.2 m1。置湿盒37 ℃1 小时,再置4 ℃过夜。用洗涤液洗三次。

2.  用稀释液稀释待检血清,然后加至40 孔板,每孔0.2 ml。置湿盒,37 ℃1 小时,用洗涤液洗三次。

3.  用稀释液将乙脑病毒抗原稀释至50 个血凝单位,对照抗原用同法稀释。分别加入40 孔板中,每孔0.3 ml。置湿盒4 ℃过夜,用洗涤液洗三次。

4.  用稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的兔标JBEV IgG,加至40 孔板,每孔0.2 ml,37 ℃l小时,用洗涤液洗三次。加邻苯二胺(OPD)底物液,每孔0.2 ml。避光置室温30 分钟。加2M H2SO4 0.05 m1,终止反应。

用分光光度计测出各孔OD 值,波长选择495 nm。

4.  结果

P/N (3.0 为血清JBEV IgM 抗体阳性。

标本平均OD 值- 空白对照OD

阴性对照OD 值一空白对照OD

2014-12-12