1. 试管标记　取分别装有不同糖类（如葡萄糖、蔗糖和乳糖等）发酵培养液的试管，根据需要培养的细菌做好标记（如大肠埃希菌、产气肠杆菌、普通变形菌等和空白对照）。

2. 接种培养　以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，空白对照中不接种，置37℃恒温箱中培养，分别在培养24h、48h和72h观察结果。

3. 观察记录　培养后各发酵管与空白对照相比，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“－”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“＋”表示。培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记录用“＋”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“－”表示。