在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,所以常用碱性染料进行染色。碱性染料并不是碱,和其他染料一样是一种盐,电离时染料离子带正电,易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色。
1. 涂片取两块干净的载玻片,各滴一小滴生理盐水于载玻片中央,用无菌操作,分别挑取金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌于二载玻片的水滴中(每一种菌制一片),调匀并涂成薄膜。注意滴生理盐水时不宜过多,涂片必须均匀。
2. 干燥于室温中自然干燥。
3. 固定涂片面向上,于火焰上通过2-3次,使细胞质凝固,以固定细菌的形态,并使其不易脱落。但不能在火焰上烤,否则细菌形态将毁坏。
4. 染色放标本于水平位置,滴加染色液于涂片薄膜上,染色时间长短随不同染色液而定。吕氏碱性美蓝染色液约染2~3分钟,石炭酸复红染色液约染1~2分钟。
5. 水洗染色时间到后,用自来水冲洗,直至冲下之水无色时为止。注意冲洗水流不宜过急,过大,水由玻片上端流下,避免直接冲在涂片处。冲洗后,将标本晾干或用吹风机吹干,待完全干燥后才可置油镜下观察。
6. 镜检:显微镜观察。