细菌细胞壁的染色实验

根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后,会产生质壁分离这一现象,经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。
1.  单宁酸法

(1)将培养16~18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。


(2)用5%单宁酸染5分钟后,水洗。

(3)用0.2%结晶紫染3~5分钟,水洗,吹干。用油镜观察,细胞壁呈紫色,细胞质呈淡紫色。

2.  磷钼酸法

(1)制备浓厚的涂片,在未干时浸入1%磷钼酸水溶液3~5分钟。

(2)用1%甲基绿水溶液染3~5分钟。

(3)水洗后,吹干,用油镜观察。细胞壁为绿色,细胞质无色。

3.  区分细胞壁与细胞质膜

(1)乙醚蒸气法

①将巨大芽孢杆菌涂布于盖玻片上,翻转盖玻片使其放在乙醚蒸气瓶的瓶口上蒸3分钟。

②取下盖玻片置Bouin氏固定液中30分钟后取出,水洗。

③用硫堇染色30秒钟。

④水洗,水封,置油镜下观察。

(2)NaCl法

①取一滴25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。

②挑一小环培养6小时的枯草芽孢杆菌,在25%NaCl水滴中涂布均匀,待自然干燥。

③滴加0.01%结晶紫于其上,使盖满有菌部分,30秒钟后水洗,干燥,用油镜观察结果。

2014-12-12