根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后，会产生质壁分离这一现象，经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。
1. 单宁酸法
（1）将培养16~18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。
（2）用5%单宁酸染5分钟后，水洗。
（3）用0.2%结晶紫染3~5分钟，水洗，吹干。用油镜观察，细胞壁呈紫色，细胞质呈淡紫色。
2. 磷钼酸法
（1）制备浓厚的涂片，在未干时浸入1%磷钼酸水溶液3~5分钟。
（2）用1%甲基绿水溶液染3~5分钟。
（3）水洗后，吹干，用油镜观察。细胞壁为绿色，细胞质无色。
3. 区分细胞壁与细胞质膜
（1）乙醚蒸气法
①将巨大芽孢杆菌涂布于盖玻片上，翻转盖玻片使其放在乙醚蒸气瓶的瓶口上蒸3分钟。
②取下盖玻片置Bouin氏固定液中30分钟后取出，水洗。
③用硫堇染色30秒钟。
④水洗，水封，置油镜下观察。
（2）NaCl法
①取一滴25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。
②挑一小环培养6小时的枯草芽孢杆菌，在25%NaCl水滴中涂布均匀，待自然干燥。
③滴加0.01%结晶紫于其上，使盖满有菌部分，30秒钟后水洗，干燥，用油镜观察结果。