1、取1%大肠杆菌E.coli接种于含2 ml LB培养基的试管中，37 ℃振荡培养过夜。
2、取0.1ml过夜培养物转种于含10 ml LB培养基的三角瓶中，37 ℃振荡培养3h至OD600=0.3。
3、然后把培养物倒入1.5 ml离心管中，冰浴10min。
4、在4 ℃下以4000 rpm离心5min，去上清液。
5、把菌体悬浮于15 ml冰冷的0.1M CaCl
2
溶液中，置冰上30min
6、然后再在4 ℃下以4000 rpm离心10min，去上清液。
7、将菌体悬浮于0.1 ml CaCl
2
溶液中，冰浴放置4-12hr备用。