细菌形态学检查实验-芽胞染色法

芽胞(Spore)是细菌的休眠状态,对各种理化因素有强大的抵抗力,能耐受恶劣环境的影响。芽胞折光性很强,可经特殊染色法染色后,在光学显微镜下观察。本实验要求学生了解两种特殊染色法并认识这种细菌特殊构造。

一、威-康(Wiltz-Conkln)二氏芽胞染色法

1.  材料
破伤风杆菌(Clostridium tetani)24 h琼脂斜面纯培养物, 3%孔雀绿水溶液, 0.5%花红水溶液, 载物玻片。
2.  方法
(1)取破伤风杆菌培养物涂膜、干燥、火焰固定。
(2)滴加3%孔雀绿水溶液加热染色3~6 min,水洗。
(3)0.5%花红水溶液复染0.5~1 min,水洗,干燥,镜检。
3.  结果观察
芽胞染成绿色,菌体染成红色。
注意芽胞的形状、在菌体中的位置和大小(与菌体横径比较)。同时可能看到没有芽胞的繁殖体和失掉菌体的芽胞。
二、Moeller氏芽胞染色法
经火焰固定的细菌涂片,以5%铬酸水溶液处理2~10 min,充分水洗。用石碳酸复红染液加热染色1 min,水洗。用5%硫酸水短时间脱色(约5 s),立即水洗。再用美蓝染液染色半分钟,水洗,吸干,镜检。结果芽胞染成红色,菌体染成蓝色。

2014-12-12