一、在平板上形成孢子
1. 挑或选择性平板上的酵母菌单菌落接种在孢子形成平板上。
如果无需选择的活,细胞在转移到孢子形成平板之前,可以在YPD平板上先培养几天。单个菌落在YPD平板上生长3~4天,而对小块细胞来说,可在平板上生长2天,这种预生长并非必需的,但它可以使孢子形成的效率更高些,在转移酵母细胞时,应用少量细胞在孢子形成平板上涂布相对较大的面积,不应见到成团的接种物。
2. 于25℃培养4天。
3. 在载玻片上滴一滴水,挑少量细胞稀释在水中,于放大倍数250×~400×显微镜下观察,即可见悬浮于水中的四分体孢子。
二、在液体培养基中形成孢子
1. 在合适的培养容器中,加入YPD培养基培养,待孢子形成的二倍体细胞生长至OD
600
为2.5~3.0。
2. 转移1 ml 培养液至一支一次性使用的无菌15 ml 聚丙烯试管中,12 000 g 离心5 min。
3. 倒去上清,用5 ml 水重悬细胞,在按步骤2离心。
4. 倒去上清,细胞用1 ml 添加了特定二倍体细胞所需营养成分的孢子形成液体培养基重悬。
2. 转移1 ml 培养液至一支一次性使用的无菌15 ml 聚丙烯试管中,12 000 g 离心5 min。
3. 倒去上清,用5 ml 水重悬细胞,在按步骤2离心。
4. 倒去上清,细胞用1 ml 添加了特定二倍体细胞所需营养成分的孢子形成液体培养基重悬。
5. 于30℃,350 r/min 以上转速培养2~3天,在显微镜下检查孢子的形成。