G＋菌细胞壁肽聚糖含量多，结构致密，脂质少，乙醇不易渗入脱色；G－菌细胞壁肽聚糖含量少，结构疏松，脂质多，乙醇容易溶解脂质而渗入脱色。G＋菌菌体含有大量核糖核酸镁盐，能与结晶紫、碘牢固结合，使乙醇不易将其脱色；G－菌菌体核糖核酸镁盐含量少，容易被乙醇脱色。G＋菌等电点比G－菌低，在同样PH值条件下比G－菌所带负电荷多，容易与带正电荷的碱性染料（结晶紫），故不易被乙醇脱色。

1. 制备标本片

（1）取干净载玻片1块，用记号笔划分为2个区域，并作好标记；

（2）两区各加生理盐水1小滴

（3）用灭菌接种环分别挑取少量细菌，在个生理盐水中混匀铺开，形成一薄层菌膜。

（4）在室温下自然干燥。

（5）将标本通过火焰2～3次固定标本，自然冷却。

2. 革兰氏染色

（1）初染：在菌膜上滴加结晶紫，以盖满菌膜为度，约1分钟后，用细水流将染液冲洗。

（2）酶染：滴加卢戈氏碘液数滴，约1分钟后轻轻冲洗。

（3）脱色：滴加95%酒精3～4滴，轻轻晃动玻片数秒钟，倾斜玻片弃去酒精，如此反复数次后，流下的酒精几乎无色或稍呈淡紫色，最后冲洗。

（4）复染：滴加稀释复红染液数滴，约1分钟后冲洗。

染色完毕后，用吸水纸将玻片吸干，滴加香柏油，镜检。

3. 结果判定：白色葡萄球菌被染成紫色，为革兰氏阳性（G＋）菌，大肠杆菌被染成红色，为革兰氏阴性（G－）菌，