1.  将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。

2.  用限制性内切酶在克隆化基因内部切开，使质粒线性化。

3.  用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株，通过质粒上带的标记进行选择，在选择培养基上纯化几个转化子，制备DNA，应用Southern 杂交确证整合是否发生在所期望的位点，并且测定是否发生了多重整合。

注意事项

如果没有单限制性酶切位点，可以在此区域用一个或多个酶消化产生一个缺口，但缺口两边须具有足够的同源序列。