1.  将目的基因亚克隆到YRp质粒，通过基因内的两个限制性位点在基因中创造一个缺口区，在缺口两侧留下≥100~250 bp 的同源区，凝胶电泳纯化质粒骨架大片段。

2.  用1~10 μg 缺口质粒DNA转化待拯救的含突变等位基因的酵母菌株，通过YRp质粒上的选择基因进行选择，应用质粒分离除去技术鉴定选择标志不稳定的转化子。

3.  在不稳定的转化子中，筛选那些仍然显示突变表型的转化子。

4.  从带突变表型的转化子中制备DNA转化大肠杆菌，分析小量制备的DNA。