当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。

1.  接种一个单菌落于5 ml无菌LB培养液中，在37°C培养至饱和状态（过夜）。

2.  取1.5 ml培养液以最大转速离心20 s。弃上清。

3.  沉淀用100 μl GTE溶液彻底重悬并于室温静置5 min。

4.  加人200 μl NaOH/SDS溶液，用指头敲击管壁混匀，于冰上放置5 min。

5.  加人150 μl乙酸钾溶液，在涡旋混合器上振荡2 s混匀，于冰上放置5 min。

6.  离心3 min，然后吸取上清液移人干净的微量离心管中，加0. 8 ml 95%乙醇，于室 温静置2 min。

7.  室温离心1min ，弃上清，用1 ml 70%的乙醇清洗沉淀，然后真空干燥。

8.  沉淀用30 μl TE缓冲液重溶，于4°C短期保存，于-20°C或-70°C长期保存，取 2. 5-5 μl进行酶切分析。