质粒DNA的小量制备实验-碱裂解法

碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。
1.  接种一个单菌落于5 ml无菌LB培养液中,在37°C培养至饱和状态(过夜)。

2.  取1.5 ml培养液以最大转速离心20 S。弃上清。


3.  沉淀用100 μlGTE溶液彻底重悬并于室温静置5 min。

4.  加人200 μl NaOH/SDS溶液,用指头敲击管壁混匀,于冰上放置5 min。

5.  加人150 μl 乙酸钾溶液,在涡旋混合器上振荡2 s混匀,于冰上放置5 min。
6.  离心3 min,然后吸取上清液移人干净的微量离心管中,加0.8 ml 95%乙醇,于室温静置2 min。

7.  室温离心1 min,弃上清,用1 ml 70%的乙醇清洗沉淀,然后真空干燥。

8.  沉淀用30 μl TE缓冲液重溶,于4 °C短期保存,于-20°C或-70°C长期保存,取2. 5~5 μl进行酶切分析。

如有必要,在酶切反应液中加人1 μl 10 mg/ml RNA酶溶液(不含DNA酶)以去除污染的RNA。

2014-12-12