该培养基用酚红作指示剂，碱性时呈红色，酸性时呈黄色，上层培养基中的乳糖用于鉴别肠道杆菌，致病菌不分解乳糖而大肠杆菌则能分解乳糖产酸使上层斜面变为黄色。还可检查细菌能否分解含硫氨基酸产生硫化氢，若产生硫化氢则与硫酸亚铁作用形成黑色硫化亚铁。硫代硫酸钠起还原作用，以防止硫化氢被氧化而影响结果。下层为含葡萄糖的半固体培养基，可以观察细菌有无动力及对葡萄糖的分解能力。

上层：肉膏汤1000 毫升，硫酸亚铁0.2 克，硫代硫酸钠0.3 克，乳糖10 克，0.2%酚红水溶液12 毫升，琼脂20 克。

下层：肉膏汤1000 毫升，葡萄糖1 克，0.2% 酚红水溶液12 毫升，琼脂3 克。

将上层和下层各成份分别混合后，经8 磅15 分钟灭菌，将下层培养基趁溶解状态分装于无菌试管内，直立于冷水中使其凝固，待凝固后，在每管培养基上加入上层培养基，使凝成斜面。