用无菌接种环取破伤风梭菌肉渣培养物，分区划线接种于血琼脂平板上，取方形玻璃板一块，中央置无菌纱布块，放1克焦性没食子酸于纱布上，然后再向纱布上滴加10%NaOH约1毫升，焦性没食子酸与碱性溶液混合后，可以吸收氧气变为棕黑的焦性没食子橙而造成厌氧环境，立即将种有细菌之平板倒盖于方形玻璃板上，并在平板四周用熔化石蜡密封。置37 ℃温箱中培养24～48小时后，取出观察结果。