厌氧培养的方法及其原理如何?
1. 将已接种细菌的血平板以及产气管,指示剂,催化剂放入塑料袋内,排出袋中气体,卷叠好袋口,并用大铁夹将塑料袋夹紧密,以防漏气。
2. 折断产气管,管内发生反应,产生CO 2 和H 2 。CO2供细菌生长需要,能促使许多厌氧菌生长,钯催化剂可催化H 2 和袋内的O 2 生成H 2 O,从而耗尽袋内的O 2 ,待其化学作用完成后,袋内即处于无氧状态。(由此造成厌氧环境约需半小时)
3. 于产气管弄破半小时后,将装有已还原成无色的美蓝指示剂安瓿弄破,若溶液变蓝色,表示美蓝被氧化,袋内仍有氧气存在,如指示剂不变蓝色,即表示袋内已处于无氧状态。
4. 将厌氧袋置37 ℃温箱孵育,48小时后观察结果。
注意事项
为了防止上述化学反应中生成的水流入平板,造成污染,应事先在厌氧袋内放多量的矽胶,以吸收水分。