体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验

抗药性细胞模型的筛选大多采取长时间药物处理、诱导抗性,最总筛选出具有一定抗性的细胞克隆。

一、培养条件

用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO 2 ,37℃培养。

二、实验步骤

1.  将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中,先用DOX(阿霉素)0.01 ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。

2.  然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml,接着进行DOX低浓度的筛选。

3.  随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC 1 作CHO和RC 1 对DOX的剂量-反应曲线,求CHO和RC 1 的IC 50 值。

4.  抗性倍数即为RC 1 的IC 50 与CHO的IC 50。

注意事项
1.   要具备培养细胞的实验室条件,谨防污染。

2.  通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC 50 值,以确定其实诱导浓度。

3.  采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株,对阿霉素等产生抗性的细胞株,往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。

2014-12-12