抗药性细胞模型的筛选大多采取长时间药物处理、诱导抗性,最总筛选出具有一定抗性的细胞克隆。
一、培养条件
用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO 2 ,37℃培养。
二、实验步骤
1. 将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中,先用DOX(阿霉素)0.01 ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。
2. 然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml,接着进行DOX低浓度的筛选。
3. 随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC 1 作CHO和RC 1 对DOX的剂量-反应曲线,求CHO和RC 1 的IC 50 值。
4. 抗性倍数即为RC 1 的IC 50 与CHO的IC 50。
注意事项
1. 要具备培养细胞的实验室条件,谨防污染。
2. 通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC 50 值,以确定其实诱导浓度。
3. 采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株,对阿霉素等产生抗性的细胞株,往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。