1. 准备新鲜的过夜菌。按1:100的比例将过夜培养的菌液加入到新鲜的LB培养液中，于37 °C培养至OD 600 为0.3~0.4。
2. 加人等体积冰冷的2 X TSS于菌液中，在冰上温和地混匀。
3. 可以将菌液分成小份用干冰/乙醇浴冻存，于-70 °C长期保存。用冻存感受态细菌进行转化时，冻存菌要缓慢融化，并立即使用。
4. 为检测感受态的效果，按照步骤将<10 ng的pBR322转化到100 μl 感受态细菌。按照 CaCl 2 转化法 的步骤8涂平板和计算转化效率。
转化效率大约为10 7 ~ 10 8 转化子/ μ g DNA。
5. 迅速融化冻存菌，将100 μl 感受态细菌和1~5 μl DNA （0.1~100 ng）加入到一个冰冷的聚丙烯管或玻璃管中，4°C放置5~60 min。
6. 加入0.9 ml含20 mmol/L葡萄糖的LB培养液，37°C温和振荡培养30~60 min。
7. 在平板上挑选转化体并保存。