变性凝胶电泳实验-电解质梯度测序胶

通过简单地提高下槽缓冲液的盐浓度,使凝胶底部的离子強度得以提高,在电泳过程中,盐离子可以电泳进入凝胶并产生重复性好的及有效的梯度。

1.  按基本方案步骤1~22灌制凝胶及进行预电泳,但上槽缓冲液为0.5×TBE,下槽为1×TBE。

2.  按基本方案步骤23~26步准备样品及加样。

3.  如需测≤400碱基的序列信息,加入3 mol/l 乙酸钠于下槽缓冲液至终浓度1 mol/l, 执行步骤5。
4.  如果需测大于400碱基的序列信息,先按步骤5进行,电泳2~3 h,然后加入3 mol/l 乙酸钠于下槽至终浓度为1 mol/l。

5.  在60 W 恒功率下电泳。

6.  进行基本方案步骤23~33。

2014-12-12