体内耐药细胞株的建立实验

细胞与低剂量的药物长期接触,引起细胞本身药物化学过程的改变,细胞膜上出现Pgp糖蛋白,使细胞逐渐对药物耐受,随着药物浓度的递增,其耐受程度逐渐加强。

一、材料准备

1.  动物选择:根据欲建立的耐药细胞株,选择合适的动物。在实验期间,一般选择同性别动物进行实验,动物体重的选择以雌性约17~21g,雄性约18~22 g 为宜。

2.  瘤株的选择:常见的瘤株均可,应依据研究目的、方向确定实验用瘤株,考虑到传代方便,且容易观察或检测,多选择腹水性肿瘤。

二、实验步骤

1.  所试药物的毒性测定

(1)把小鼠随机分成5~8组,每组10~20只小鼠,每只动物每天给予定量的药物,每天1次,连续给药5天,然后观察30天。

(2)记录30天内动物的死亡数。药物的剂量应能使动物的死亡率从0~100%。

(3)计算LD 10 及95%的可信限,耐药株建立的最初剂量约为1/6LD 10

2.  瘤细胞生长测定

(1)用传代第7天的腹水癌细胞给每只动物接种15×10 6 个细胞,7天后处死动物,开腹,收集全部腹水,腹腔用含150 IU的肝素生理盐水冲洗3次。

(2)合并腹水及冲洗液进行瘤细胞计数,腹水5 500 g 离心5 min,测定瘤细胞压缩体积。

(3)统计不同剂量用药组及对照组的瘤细胞压缩体积,可以测出药物对肿瘤细胞生长的影响。

(4)药物剂量一般在LD 10 时,能完全抑制敏感株肿瘤细胞的生长。

2014-12-12