二、仪器药品
(1)721分光光度计;(2)水浴锅;(3)离心机;(4)移液管;(5)烧杯;(6)容量瓶;(7)研钵;(8)冰醋酸;(9)具塞试管;(10)脯氨酸;(11)80%乙醇;(12)茚三酮试剂:将2.5g茚三酮溶于60ml冰醋酸和40ml 6M磷酸中,加热(70℃)溶解,试剂至少在24小时内稳定。
三、实验步骤
1. 绘制标准曲线
取脯氨酸溶于80%乙醇中,然后稀释成下列浓度:0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15、20、25、30μg/ml。分别取标准溶液2ml,冰醋酸2ml,茚三酮试剂2ml加入试管中,用橡皮塞塞紧,于沸水浴中加热15分钟。用分光光度计于波长515nm下进行比色测定,以浓度0为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标,以光密度为纵坐标作标准曲线。
2. 植株样品液的提取
选取植株功能叶片2g,用3ml 80%乙醇研磨(放少许石英砂),成浆状,用80%乙醇洗研钵,将提取物和洗液置于试管中,80%乙醇总量为10ml。加盖置于黑暗中室温下提取24小时或水浴。
将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤,重复过滤一次,除去色素和残渣。将提取液置于试管中,加其重1/5的人造沸石强烈振荡5分钟。将上层液在离心机上离心10分钟,取上清液备用。
3. 样品溶液的测定
将离心后所得上清液,取2ml置于试管中,再加入2ml冰醋酸和2ml茚三酮试剂,加盖密封,在沸水浴上加热15分钟。用3ml 80%乙醇代替样品液作对照。在分光光度计上用515nm进行比色测定。读出光密度后,从坐标曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。
4. 结果计算: