叶绿体色素中的各种色素化学结构不同,因而它们的物理化学性质如极性、吸收光谱、溶解度等也不同。叶绿素和类胡萝卜素是酯类化合物,不溶于水仅溶于已烷、石油醚等非极性溶剂中,可利用不同色素在各种有机溶剂中的分配系数以及在吸附剂上被吸附程度的不同而将叶绿体色素分离开。
取一张色层分析滤纸,剪成方形,其边长略大于培养皿的直径,在其中心打一小圆孔。另取1小长条分析滤纸,将浓叶绿体色素提取液涂在滤纸条的一条长边上,并使所涂的色带尽量窄,使之风干;连续涂四、五次,待风干后将滤纸条搓成二公分的纸捻,并将点样端插入方形滤纸的中心,作为“灯心”。
取大型培养皿一个,其中放一短玻管,管内盛有少量汽油约占玻管容积的1/2至2/3,加入一、二滴苯。将上法制备的“灯心”插入小玻管中,把培养皿盖好,放在弱光下或暗处。
用滤纸制成的“灯心”借毛细管作用吸收溶剂,溶于溶剂中的色素随之向四周扩散,10-20分钟后可得到不同颜色的色素同心环:叶绿素a为蓝绿色,叶绿素b为黄绿色,叶黄素呈鲜黄色,胡萝卜素则为橙黄色。
在做好的色环滤纸片上注明色素种类名称,附在实验报告内。