凡有生活力的种子能不断地进行呼吸作用,吸收空气中的O2,同时放出CO2,CO2溶于水生成H2CO3,H2CO3不稳定解离成H+和HCO3-。由于H2CO3不断解离,就使周围介质酸度逐步增加。用BTB测定出酸度的改变。BTB的分子结构式如图: 它的变色范围为pH6.0-7.6之间,它在酸性介质中呈黄色,在碱性介质中呈蓝色,中间经过绿色(变色点为pH7.1)。
一、材料和设备
玉米或小麦种子
恒温箱、培养皿、镊子、滤纸、药物天平、烧杯、漏斗、琼脂、BTB、电炉、50 ml 量筒
0.1%BTB溶液:称取BTB 0.1克,溶解于煮沸过的自来水中,然后用滤纸滤去残渣。滤液若呈黄色,可加数滴稀氨水,使之变为蓝色或蓝绿色,此液长期贮存于棕色瓶中。
1.5%BTB琼脂凝胶:取0.1%BTB溶液40 ml置于烧杯中,另称取0.5克琼脂,将其剪碎后加入杯中,用小火(电炉)加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解,稍稍冷却即可趁热倒入9cm 培养皿中,使之成一均匀的薄层,完全冷却后备用。
二、实验步骤
1.浸种:将待测种子在30℃-35℃温水中浸种5小时左右,以增强种胚的呼吸强度。
2.显色:取吸胀种子10粒,整齐地埋于备好的琼脂凝胶中,注意要将胚埋入凝胶中。将培养皿置于35℃温箱中一小时可见结果,两小时以上结果更为明显。观察种胚周围出现黄色晕圈的是活种子,否则是死种子。
3.计算:逐一数出种胚周围出现黄色晕圈的种子数,并计算出有生活力种子的百分率