一、材料与设备
小麦幼苗
直径8cm 培养皿,10 ml 量筒,100 ml 量筒,药物天平,小漏斗,小剪刀,25 ml 容量瓶,研钵,滤纸,721分光光度计
药品
100pp M 激动素溶液:10毫克激动素用少量0.1N HCl溶解,用蒸馏水定容至100 ml 。
丙酮,0.1NHCl,80%g丙酮。
二、实验步骤
1.在7个培养皿中分别加入蒸馏水和0.05pp M ,0.5pp M ,5pp M ,50pp M 的激动素溶液各10 ml 。每一处理重复3次。
2.选生长一致的小麦幼苗,剪下第一完全叶,切去尖端1.5cm ,取其后3cm 长的切断。向每一培养皿放进此切断0.500-1.000克。然后将培养皿放在散射光下培养1-2周。
3.从培养皿中取出小麦叶片,用滤纸吸干水分,放入研钵中。再向研钵中放入少量石英砂,少量碳酸钙以及4-5 ml80%丙酮,仔细研磨成浆,过滤到100 ml 容量瓶中,研钵用80%丙酮4-5 ml洗两次,洗出液过滤。滤渣和滤纸再放入研钵中,研磨,过滤。如此反复,直到滤出液无绿色。滤液用80%丙酮定容至100 ml 。
4.将721分光光度计灵敏度转在3的位置,以80%丙酮为空白对照,在663n M 和645n M 处比色。
三、结果
叶绿素浓度按下式计算:
〔ch1〕=20.2×D645+8.02×D663
〔ch1〕=叶绿素浓度,单位 M g/升。
D645:叶绿素溶液在645n M 处的消光值。
D663:叶绿素溶液在663n M 处的消光值。