希尔反应(Hill reaction)是绿色植物的离体叶绿体在光下分解水,放出氧气,同时还原电子受体的反应。氧化剂2,6-二氯酚靛酚是一种蓝色染料,接受电子和H+后被还原成无色,可以直接观察颜色的变化,也可用分光光度计,还可以对还原量进行精确测定。
一、材料、仪器设备及试剂
1.材料
菠菜或其他绿色植物新鲜叶片。
2.仪器设备
研钵,刻度试管,漏斗,纱布,小烧杯,剪刀。
3.试剂
(1)0.1% 2,6-二氯酚靛酚, 石英砂。
(2) 提取用的缓冲液:内含0.05 M tris(三羟甲基氨基甲烷),pH7.5,0.4 M 蔗糖,0.01 M NaCl;
二、实验步骤
1. 首先取冰放入不锈钢盆中,然后装入塑料袋里,再将预冷的研钵置于冰上。
2. 取12克新鲜菠菜叶,洗净擦干,去中脉剪碎放入座在冰中的研钵里,加10 ml (预先冷冻的)提取液。
3. 迅速研磨破碎细胞(破碎一定要彻底),再用约10 ml 冷冻提取液混匀,得悬浮液。将悬浮液通过三层纱布,过滤到小烧杯中。
4. 滤液装入一支离心管中,1000转/分离心3-5分钟(离心管一定要配平),将上清溶液装入另一支离心管(尽量去除杂质,宁可损失一部分溶液,也不要将沉淀移入离心管),弃去沉淀(未破碎的细胞及组织残渣)。即得到叶绿体悬浮液。
5. 取试管两支,每支试管中加入叶绿体悬浮液5 ml 。
6. 加 0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液5-6滴,摇匀。将其中一支试管置于直射光下,另一支试管置于暗处,注意日光下的试管中溶液颜色变化。5-8 M in 后,将置于暗处的试管取出,比较两试管溶液颜色变化,并解释原因。