1. 叶绿体色素提取
称取新鲜叶片2g剪碎于研钵中,加少量95﹪酒精(或80﹪丙酮)和少量CaCO3粉及石英砂,研磨成匀浆,再加95﹪酒精(或80﹪丙酮)l0ml稀释研磨后,用滤纸过滤于小瓶中,滤液即为叶绿体色素提取液。
2. 叶绿素的皂化作用(绿色素与黄色素的分离)
(1) 用移液管吸取叶绿体色素提取液约5ml放入试管中,再加入1.5ml左右20﹪KOH甲醇溶液,充分摇匀。
(2) 片刻后,加入5ml苯,摇匀,再沿试管壁慢慢加入1~1.5ml蒸馏水,轻轻混匀(勿激烈摇荡),静置试管架上,可看到溶液逐渐分为两层,下层是稀的乙醇溶液,其中溶有皂化叶绿素a和b(以及少量叶黄素),上层是苯溶液,其中溶有黄色的胡萝卜素和叶黄素。
3. H+和Cu2+对叶绿素分子中Mg2+的取代作用
(1) 吸取叶绿体色素提取液约5ml放入试管中,加入30﹪醋酸数滴,摇匀,观察溶液颜色的变化。
(2)当溶液变褐色后,倾出一半于另一试管中,投入几粒醋酸铜粉,微微加热,观察溶液颜色变化,与未加醋酸铜的一管相比较。
(2)解释上述颜色变化过程,并列出其反应式。
4. 叶绿素的荧光现象
取比较浓的叶绿素提取液5ml放入试管中,在直射光下观察溶液的透射光及反射光
的颜色有何不同?试述其原因。
5. 光对叶绿素的破坏作用
(1)取两支试管,各加入经稀释的叶绿体色素提取液5ml,一管放在直射光下,另一管放在黑暗处,1~2 h后观察二管溶液颜色有何变化。
(2) 另取上述实验Ⅰ中用纸层析法分离成的色谱两张,一张放在直射光下,另一张放在黑暗中。约1 h以后比较两张色谱上四种色素的颜色各有何变化。
(3) 解释以上结果。