植物种子经常存在许多能够在紫外线照射下产生荧光的物质,如某些黄酮类,香豆素类、酚类物质等,在种子衰老过程中,这些荧光物质的结构和成分往往发生变化,因而荧光的颜色也相应改变,有些种子在衰老死亡时荧光物质的性质虽未改变,但由于生活力衰退或已死亡的细胞原生质透性加大,浸种时种子中的荧光物质很容易外渗。前一种情况可以用直接观察种胚荧光的方法确定种子生活力,后一种情况则可通过观察荧光物质渗出的多少来确定生活力。
一、材料、仪器设备
1. 材料:植物种子。
2. 仪器设备:紫外线荧光灯,不产生荧光的白纸,刀片,镊子。
二、实验步骤
1. 直接观察法
此法适用于一些松柏类,禾谷类及某些蔷薇科果树种子,但种间差异较大。用刀片沿胚的中心线将种子纵切成两半,取一半放在不产生荧光的白纸上,使种子的切面朝上,放在紫外线荧光灯下照射并进行观察,记载。有生活力的种子产生明亮的兰色、兰紫色、紫色或兰绿色的荧光,死种子多半是黄色、褐色以至暗淡无光,并带有多数斑点。
观察100粒种子,记下有生活力和丧失生活力种子数量,估计出发芽率,并与普通发芽实验法得到的实际发芽率相对照。
2. 纸上荧光团法
把浸泡过的完整无损的种子,按一定距离放在湿滤纸上(注意,滤纸上的水分不可过多,防止荧光物质流散)搁置一定时间(几小时)后,使滤纸(或连种子一起)风干,放在紫外荧光灯下照射,可以看到死种子周围有一圈明亮的荧光团。根据荧光团的数目就可以确定死种子的数目,每次至少测定100粒种子,并估计发芽率,与普通发芽试验法测得的实际发芽率相对照。这个方法应用在白菜、萝卜等十字花科植物种子上,效果很好。但对于衰老死亡后会减弱荧光或失去荧光的种子不适用,对于后一种情况应采用直接观察法。