常用的显带方法,有操作简便、经济和能长期保存的优点,有关G带显示法在文献中报道极多,但不一定都能重复出满意的效果,可能与各研究室所用材料条件有关,因此引进任何一显带法之前,还要进行预试验。
一、胰酶-Giemsa 混合显带法
1. 预处理
最中期染色体标本,置60 ℃~80 ℃温箱中20~30 分钟,或在37 ℃温箱过夜;然后浸入0.025 M磷酸缓冲液中,pH6.8,56 ℃温浴10 分钟(不经此步亦可);
2. 消化和染色
用现配的胰蛋白酶-Giemsa混合液消化和染色10~30 分钟,混合液按如下比例配制
0.025 M 磷酸缓冲液pH6.8 73.0 ml
甲醇 27.0 ml
Giemsa干粉 50.0 mg
0.25%胰酶 0.3~0.4 ml
3. 封片
染色后用自来水冲洗(流水冲洗标本背面),入蒸馏水漂洗数次、晾干、二甲苯透明2~3 分钟、封入中性树脂中。
二、Giemsa 显带法
1. 预处理
将标本置入60~80 ℃温箱或烤箱中20~30 分钟;亦可在37 ℃温箱中 过夜;
将标本置入60~80 ℃温箱或烤箱中20~30 分钟;亦可在37 ℃温箱中 过夜;
2. 胰酶消化
用0.85 %的NaCl配制0.25 %胰蛋白酶溶液(微孔滤膜无菌滤过) 消化3~5 分钟(用滴加在标本上或用染色缸消化均可);
3. 染色
取出标本片,先直立于吸水纸上除去多余胰酶液后,随即置入Giemsa 染液中,染10 分钟;
4. 封片
自来水洗、蒸馏水漂洗、晾干、二甲苯透明2~3 分钟、封入中性树胶中。
注意事项
1. 胰酶消化显带过程中,胰酶消化是重要的环节,消化不足带不出现,消化过
度,染色体变得膨胀和不着色,必须把握好胰酶浓度和消化持续时间。
2. 预处理或老化是 显带过程中另一个重要环节,对消化和染色有很大影响,其中干热处理是较简便易行和 效果好的办法。
2. 预处理或老化是 显带过程中另一个重要环节,对消化和染色有很大影响,其中干热处理是较简便易行和 效果好的办法。