镨铷滤光片在可见光区域最大吸收峰为529nm,利用这个特性校正721分光光度计
一、 校正
1. 预热仪器
2. 置波长580nm处,T %调至最大,用一白纸条观察是否有光强均匀的光斑在吸收池处出现,调节光源灯泡使用其符合要求.
3. 把灵敏度钮置于最低端,波长度盘置529nm处,反复调节透光度和100%直至稳定,将镨铷滤光片插入光路,仔细旋转波长度盘,找到T值最低点,此时波长应为529nm(λm)
4. 计算波长误差:Δλ=λ-λm
5. 校正:调波长于529nm处,取出镨铷滤光片,调节T值至于100%处,再插入镨铷滤光片,打开盖板,调节波长校正螺丝,使值最低.波长校正步骤反复检查波长误差,直至符合要求。
二、重复性检查
1. 用蒸馏水作空白将波长度盘固定在先690nm,调节透光度为100%.
2. 连续测量五次硫酸铜标准液(31.35mol/L即 2000ug/ml),分别记录
透光度值。
3. 计算:Δl=lmax-lmin。
Lmax. lmin分别为透光度最大值和最小值,一般要求Δl小于0.5%
三、 吸收曲线制作
1. 连续测定五个不同浓度的蛋白标准液,记录其吸光度值.
2. 分别以浓度为横坐标. 吸光度为纵坐标绘制吸收曲线.