一、实验试剂:
1. 标本选择:一般可用于新鲜干燥的涂片,未染而长期储存的标本也可用。如用瑞氏法染过的标本,先用酸酒精脱色然后进行PAS染色亦可.
Schiff氏液.
2. 配制:碱性复红1克溶于200毫升沸水中,冷却至60℃时进行过滤,滤后、加20毫升1N HCI再加入NaHSO32克(多加亦可),以有强烈的SO2刺鼻味为佳,塞紧瓶口过滤,液体呈淡茶色可用.之后再加入300mg活性炭过滤,滤液应透明无色.保存于4℃冰箱.
二、实验步骤
1. 干燥血片或骨髓片固定于95%酒精10分钟
2. 蒸馏水冲洗几次
3. 1%过碘酸(水溶液)10分钟(可用1-2周)
4. 用蒸馏水冲洗几次
5. 放入Schiff’s液30分钟
6. 自来水冲洗(大约5分钟)最后用蒸馏水冲洗,然后用2%甲绿复染20分钟.
积分标推:(血片计数小淋巴细胞)
“0” 胞浆内没有颗粒
+ 胞浆中有一圈PAS阳性颗粒
++ 胞浆中有二圈PAS阳性颗粒
+++ 胞浆内有三圈PAS阳性颗粒,或有大团块形成
计数100个细胞求其积分
正常值:(血片淋巴细胞)
阳性率10-30%,积分12-56,均数31
有核红细胞积分法:
“0” 阳性
“+” 胞浆中分散有少量阳性颗粒或呈浅红色,应比正常红细胞色深
“++” 胞浆中有1或2个浓的颗粒环,或胞浆呈中等度弥散之红色
“+++” 胞浆中有大量浓颗粒,或呈甚深之红色
正常值:有核红积分0-7大多数阴性.
2. Schiff’s液中SO2饱和度与PAS反应的恒定性有关,NaHSO3如时间久了会失效,配出SO2达不到饱和,因此NaHSO3可多加。
3. 碱性品红出厂牌号与染色深浅有关,加NaHSO3过夜后仍为红色则说明染料不合用.
4. 活性炭可以多加,其目的在于吸附颜色,如系品红不合用多加活性炭颜色亦不能被吸附.
5. 配制Schiff’s液器械需十分清洁干燥。