1. 将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中,至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后,用搅拌棒于4℃搅拌过夜,最终获得一种均匀粘稠液体。
2. 将一个较大的超声波探头插入烧杯液体中,通过超声波将DNA剪切至2~15 kb(平均7 kb )大小的DNA片段。
3. 用缓冲液平衡酚抽提,将经剪切的鲑精DNA溶液移50 ml 锥形管中,加入等体积缓冲液平衡酚,混匀后于3 000 g 离心5~10 min(或直到清晰地分相为止)。将含有DNA的上相转移到一个干净的试管中。
4. 再用1:1 (v/v)缓冲液平衡酚/氯仿、氯仿分别抽提,然后将含DNA的上相转移到一个适合髙速离心的离心管中。
5. 分别加入1/10体积的3 mol/l 乙酸钠和2.5体积冰冷的无水乙醇,充分混匀后,于约12 000 g 离心15 min。
6. 弃上清,用70%乙醇洗涤沉淀并干燥,DNA以无菌的TE缓冲液重溶至浓度为5~ 10 mg/ml。
7. 于100℃将DNA变性20 min,然后迅速置于冰浴。用微量离心管分装DNA,于-20℃保存,需要时再取出解冻,用于转化实验之前要重新煮沸。