用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA 酶,用氯化锂选择沉淀RNA ,其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA,具有快速简洁的长处,但也存在少量DNA的污染及RNA 得率不高,小RNA 片断丢失的缺陷。
一、组织或细胞匀浆
1. 对于大量组织或细胞,则每克组织或细胞加入5~10 ml 氯化锂-尿素溶液,匀浆器高速匀浆2分钟。
2. 对于少量细胞(10 7 个细胞/ml),则每克组织或细胞加入0.5 ml 氯化锂—尿素溶液手工匀浆,并转移至Eppendof管中。
二、纯化
1. 匀桨液在0~4℃放置4小时后,12 000 g 离心30分钟。
1. 匀桨液在0~4℃放置4小时后,12 000 g 离心30分钟。
2. 取沉淀,加入原匀桨液1/2体积的氯化锂—尿素溶液,重复步骤1。
3. 沉淀用原匀浆液1/2体积的氯化锂—尿素溶液复溶后,加入等体积酚/氯仿/异戊醇在室温放置15~30分钟并不时摇动混匀,4 000 g 离心5分钟。
4. 取上层水相,加1/10倍体积的3 M 乙酸钠(pH5.2)及2倍体积的乙醇,-20℃放置1小时,5 000 g 离心。
5. 70%乙醇洗沉淀一次,真空干燥。
6. RNA 溶解液溶解沉淀,得RNA 。
三、保存
分装,于-70℃保存。
三、保存
分装,于-70℃保存。