核酸是多聚阴离子的水溶性化合物,可以与许多1价、2价离子结合形成盐类,后者在有机溶剂中不溶解也不变性.在较低温度下形成沉淀.
实验试剂:
1. 3mol/L醋酸钠缓冲液,pH5.2:称取醋酸钠(NaAC·3H20)408.1g,由于800ml水中,用冰醋酸调节至pH5.2,加重蒸馏水至1000ml.分装后高压灭菌(以下称3mol/L醋酸钠缓冲液).
2.无水乙醇及70%(V/V)乙醇.
实验操作:
1. 将含核酸的溶液用移液器转至一新的Eppendorf离心管,同时测量合算溶液的体积.
2. 加入1/10体积的3 mol/L醋酸钠缓冲液。使醋酸钠的终浓度为0.3mo1/L.
3. 下颠倒混匀后,准确加入2倍体积(RNA为2.5倍体积)的预冷无水乙醇,颠倒混匀,置冰浴中15-30 min或一20℃30 min。
4. 4℃12000 r/min,离心15 min.
5. 手持Eppendorf成45度角,使核酸沉淀面向上,用微量移液器或连接真空泵的吸头不可接触沉淀物.
6. 向管中加入预冷的70%乙醇至2/3体积.混匀漂洗,以除去残余的盐.
7. 4℃12000 r/min离心 2min,如步骤5吸取上清液.
8. 不盖管盖置室温10-l5min或真空中2 min,使乙醇挥发。