一、实验试剂:
1.12.5%亚硫酸钠溶液:称取无水亚硫酸钠(A.R或GP〕125g溶于蒸馏水中并用蒸馏水稀释至1000m1.
2. 9g/L NaCL 溶液
3. 双缩脲试剂
4. 标准白蛋白血清
二、操作方法:
在15×100mm试管内加入血浆0.5ml,再加水125g/L亚硫酸钠溶液混匀,置于37℃水溶15min或更长时间,取出、离心、倾弃上清液,沉淀再以125g/L亚硫酸钠溶液洗三个多小时.洗时先同小量亚硫酸钠使它分散均匀.离心应倾弃上请液,将试管置于滤纸上,淋干管内液体于管内加入9g/L NaCL 1.0ml,充分混台使沉淀溶解即为“测定管”,在另一试管中用0.lm1刻度吸管准确加标准血清0.05m1并加入9g/L NaCL溶波0.95m1,混合作为标准试管,在另一试管中加入9g/L 氯化钠溶液1ml作为空白管.
在空白管标准及测定管内各加双缩脲试剂,混合后的室温放置30min540nm波长进行比色以空白管校正吸光度到零点,读取各管内吸光度读数。
三、计算:
测定管吸光度/标准管吸光度×O.1×标准血清蛋白浓度=纤维蛋白原g/L血浆
2. 以亚硫酸钠先洗涤沉淀是为了支除纤维蛋白以外的蛋白质,所以在洗涤时须将沉淀均匀分散.
3. 在洗涤沉淀时,如纤维蛋白原被亚硫酸钠溶液全部或部分溶解可再将试管置37℃水浴,以待纤维蛋白原析出.
选择标准液时不能任选未知性能的蛋白作为血清蛋白质的标准液。