一、实验试剂:
1、异丙醇
2、氧化铝(层析用中型氧化铝,用蒸馏水洗数次,倾去不易下沉的细颗粒,吸滤干后在110℃烘箱中活化至少8h,贮藏在密闭容器或干燥器内.
3、三氯化铁贮存液:称取FeCl3贮存液与浓硫酸(优级纯)按1:1体积混合,室温放置可稳定2个月左右.
4、显色剂;1g/L(即0.18/dL Fecl贮存液与浓硫酸(优级纯)按1:1体积混合,室温放置可稳定2个月左右.
5、胆固目标准液:精确称取胆固醇(纯度99.5%以上)200mg,用异丙醇配成100ml存4℃冰箱内,临用时达到室温后才可吸取.
二、实验操作:
l、吸取血清及标准液(或定值血清)20Oul,分别放入带塞离心管中,向管底吸入异丙酸5.0ml,冲散血清,使蛋白沉淀成细颗粒,加塞混匀后放置6O℃水浴中1min,加入氧化铝(或沸石合剂)1g加塞,将试管横卧固定在震荡器上振10min(也可用旋祸混合器或手摇)离心.
2、测定管及标准管中分别加入相应的上清液1ml,空白管加异内醇lml,放入60℃水浴中1min,分别沿管壁加入显色剂3ml,充分混匀继续放在60℃水浴中15min,然后置室温冷却后比色.
3、用光度计比色,波长530-550nm,以空白管校零点,读取各管吸光度,用1cm比色杯时,线性范围至少可达10.3mmol/L(400g/dL).
三、计算:
血清胆固醇浓度=测定管吸光度/标准管吸光度×标准液胆固醇浓度
2、本法可以同时测定甘油三脂和胆固醇.
3,抽提波与显色剂混合时产生热,发落程度与显色深浅有关。故操作时应注意F列各点。
(l)同一批标本测定时需用同样口径及厚度的试管,为便于混合,试管口径最好大些。
(2)沿管壁加人显色剂,须与异丙醇抽提血清为两层,然后迅速混合,不可边加边摇否则显色不完全。
(3)显色剂必须加一管混合一管,不可成比加完一起混合,混合后手法要一致。
4、所有试管和比色杯均须干燥,浓H2SO4必须优级纯密闭保存防止吸水。
5、本法准确性接近ALBK法,回收率接近100%,重复性好,熟练操作者内CV<1%天与天之间<2%。