一、需氧培养法:本法是临床细菌室最常用的培养方法,适合一般需氧和兼性厌氧菌的培养。需氧培养的常用温度为35-37℃,这适合于绝大多数致病菌的生长。此外,还有用 4℃ 培养,如李斯德菌除了能在 37℃ 中生长外。还能在 4℃中生长,而其他革兰氏阳性菌则不能,故可用于鉴别。李斯德菌在 25℃ 培养时有动力,胎儿弯曲菌则可以在 25℃ 中生长。
二、二氧化碳培养法:有些细菌如脑膜炎奈瑟氏菌,淋病奈瑟氏菌和布鲁杆菌,初次从临床标本中分离时,都需要有 5% 一 10% 的CO。环境,这些菌才生长良好。通常需供给 COZ 的方法有:
1、M 氧化碳培养箱:是一台特制箱子,即能调节 CO2 的含量,又能调节所需的温度(一般为 35-37℃),CO2 是用钢瓶定期充有99.99% 含量的 CO2,再将此钢瓶与 CO2 培养箱的 CO2 运送管连接,钢瓶上的真空表可以指示 CO2 输出量,此法可供大型实验室应用。
2、烛缸法:将己接种好的平板或试管培养基,置入干燥器内,并放入点燃的蜡烛。干燥器盖的边缘涂上凡士林,盖上盖子,烛光经几分钟后自行熄灭,此时干燥器内的CO2 含量约占 5-10%,再将放有培养物的干燥器置 37℃ 培养箱中培养。
3、化学法:常用碳酸氢钠盐酸法。按每升容积称取碳酸氢钠 0.4 g,浓盐酸 0.35 ml的比例,分别置入容器内,将容器放入干燥器内,待放好培养物后,盖紧干燥器的盖子,倾斜容器使浓盐酸与碳酸氢钠接触生成 CO2。
三、厌氧培养法:本法适用于专性厌氧菌的培养。其方法有化学法、生物学方法以及综合方法。常用的厌氧法有:
l、庖肉培养基法:用马肉或牛肉渣加适量肉汤制备而成,适用于所有厌氧菌特别是梭状芽胞杆菌的培养。
2、焦性没食子酸:在一清洁的玻璃板上放置一块消毒沙布,在沙布上加少量焦性没食子酸和 KOH(NaOH)。立即盖上己接种标本的平板培养基,平板四周用石蜡封住,阻止氧气进人。待上述药品起化学反应后,可吸收氧气,造成厌氧环境。
此法简便,适用于一般实验室,但该化学反应中产生的焦性没食子碱,对细菌有一定毒性作用,故分离率不高。
3、厌氧罐法:利用能密封的罐子,以物理或化学方法造成无氧环境。常用抽气换气法和冷触媒法。前者抽出罐内空气,充入氮气,如此反复三次,最后充入10%H2,10%CO2,80%N2 的混合气体,并用钯为触媒,催化 O2 与 H2化合成水,达到厌氧环境。罐内置美兰指示液,有氧时美兰呈兰色,无氧时被还原为无色。后者在厌氧罐内放置产气袋,袋内装有硼氢化钾,碳酸氢钠和枸橼酸制成的药片,使用时剪开上角,加入10 ml 水,立即盖好罐盖,扭紧固定卡,此时由气袋内产生的 H2,在事先放人罐内的靶粒催化下,与同罐内的 O2 结合成水,10-30s 即见罐盖和罐壁上出现水滴,罐内厌氧条件由液体美兰指示剂指示。此法效果好,适用于大、中型实验室。
4、气袋法:将接种好的平板培养基,置入特制的塑料气袋中,并密封袋口,其厌氧原理同厌氧法的冷触媒法。此法简便,宜用于床边接种和基层实验室。